化妆品细菌回复突变试验方法步骤


化妆品细菌回复突变试验的主要目的是检测化学物质是否具有致突变性,即检测其是否会引起基因突变的能力。这种试验通常被称为Ames试验,是由美国科学家布鲁斯·艾姆斯在1970年代开发的。
细菌回复突变试验利用特定类型的突变菌株,这些菌株携带有特定的基因突变,导致它们不能在没有外源性营养物质的培养基中生长。通过将这些菌株暴露于测试化合物中,如果该化合物具有致突变性,它会诱导这些突变菌株产生基因回复突变,使其重新获得在无外源性营养物质的培养基上生长的能力。因此,通过检测这些回复突变菌株的生长情况,可以评估化合物的致突变性。
化妆品细菌回复突变试验方法步骤
1.菌株准备
选取具有已知突变的鼠伤寒沙门氏菌或大肠杆菌菌株,这些菌株通常是组氨酸或色氨酸营养缺陷型。
2.培养基准备
准备缺乏特定氨基酸(如组氨酸或色氨酸)的选择性琼脂培养基。
3.化合物处理
制备待测化合物的不同浓度溶液,通常还包括阳性对照(已知致突变物)和阴性对照(不含致突变物)。
4.预实验
对未知或怀疑对试验菌株有抑制作用的试验样品进行预实验,评估样品是否有细胞毒性。如有抑制作用,则需对试验样品进行梯度稀释,直至找到无细胞毒性的浓度范围。
5.主试验
菌株培养:将冷冻保存的菌株培养物接种于营养肉汤培养基中,培养至对数增长期。
顶层培养基准备:融化顶层培养基,并将其分装于无菌小试管中。
混合与培养:在保温的顶层培养基中加入试验菌株的新鲜菌液、试验样品浸提液(或阴性、阳性对照液)以及代谢活化剂(如S9混合物),混匀后迅速倾倒在底层培养基上,静置凝固。
培养与观察:将培养皿放入培养箱中,在适宜温度(通常是37℃)下培养48-72小时,观察并记录菌落生长情况。
6.结果判读
阳性结果:如果暴露于待测化合物的菌株产生的反向突变菌落数量显著多于阴性对照,则该化合物被认为是致突变的。
阴性结果:如果没有显著增加的反向突变菌落,化合物被认为是非致突变的。
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